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橘虞初夢 2024-10-22 光譜儀維修 776 次瀏覽 0個評論
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微生物質譜儀作為現代微生物學領域的重要分析工具,以其快速、準確、高通量的特點,在臨床醫學、環境監測、食品安全等多個領域發揮著重要作用,本文將通過圖解的方式,詳細介紹微生物質譜儀的使用方法,幫助讀者更好地理解和應用這一技術。

微生物質譜儀概述

1.1 微生物質譜儀簡介

微生物質譜儀是一種利用質譜技術對微生物進行快速鑒定和分類的儀器,其核心原理是通過電離和加速微生物樣品中的分子,使其在電場或磁場中發生偏轉,根據質荷比(m/z)的不同進行分離和檢測,最終得到微生物的特征性指紋圖譜,并與數據庫中的標準圖譜進行比對,實現微生物的鑒定。

1.2 微生物質譜儀的組成

微生物質譜儀主要由進樣系統、離子源、質量分析器、檢測器、真空系統及數據分析系統組成,離子源、質量分析器和數據分析軟件是質譜儀的核心部件。

進樣系統:負責將微生物樣品引入質譜儀。

離子源:使中性原子或分子電離,并引出離子束流。

質量分析器:根據離子的質荷比進行分離。

檢測器:檢測分離后的離子信號。

真空系統:維持質譜儀內部的高真空環境,減少離子碰撞和散射。

數據分析系統:對檢測到的質譜數據進行處理和分析。

微生物質譜儀操作流程(圖解)

2.1 樣品制備

步驟一:樣品采集

根據實驗要求采集微生物樣品,樣品可以是細菌、真菌、酵母等微生物的菌落或培養液。

步驟二:樣品預處理

對采集的樣品進行預處理,如提取、濃縮、純化等,具體方法根據樣品類型和實驗要求而定,對于細菌樣品,可以采用直接涂抹法、擴展涂抹法或甲酸提取法等方法進行預處理。

圖解示例

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2.2 儀器預熱與準備

步驟一:打開質譜儀電源

打開質譜儀的電源開關,等待儀器自檢完成,可以聽到質譜儀內部溶劑切換閥切換的聲音,同時機械泵開始工作。

步驟二:啟動軟件

啟動質譜儀配套的數據分析軟件,進行必要的設置和初始化。

圖解示例

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2.3 進樣

步驟一:選擇合適的進樣方式

根據實驗要求選擇合適的進樣方式,如直接進樣口、高效液相色譜(HPLC)或氣相色譜(GC)等,對于微生物樣品,通常采用直接進樣口。

步驟二:導入樣品

將預處理好的樣品導入質譜儀的進樣系統,確保進樣量符合儀器要求,避免離子抑制或飽和。

圖解示例

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2.4 數據采集

步驟一:設置數據采集參數

在數據分析軟件中設置數據采集參數,包括掃描范圍、電離模式、解析度和積累時間等。

步驟二:啟動數據采集

啟動數據采集功能,記錄樣品產生的質譜數據。

圖解示例

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2.5 數據分析與解釋

步驟一:數據分析

使用數據分析軟件對采集到的質譜數據進行處理和分析,識別目標化合物或微生物,并進行定性或定量分析。

步驟二:數據解釋

根據分析結果,推斷樣品的成分或微生物組成,將得到的微生物蛋白質組指紋圖譜與數據庫中的標準菌株圖譜進行比對,確認鑒定結果。

圖解示例

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三、MALDI-TOF質譜技術在微生物檢測中的應用

3.1 MALDI-TOF質譜技術簡介

基質輔助激光解析電離飛行時間質譜技術(MALDI-TOF MS)是一種基于微生物特征性核糖體蛋白指紋圖譜的鑒定技術,自上世紀80年代開發以來,MALDI-TOF質譜在微生物檢驗常規診斷中的應用越來越廣泛。

3.2 MALDI-TOF質譜技術的優勢

與傳統表型鑒定、生化和分子生物學方法相比,MALDI-TOF質譜在微生物鑒定方面具有快速、準確、成本低、高通量的優勢,其檢測時間可縮短至幾分鐘至幾小時,且鑒定結果

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